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如何利用振動(dòng)切片機(jī)切出高存活率的活體肺組織切片

2024-05-23

實(shí)驗(yàn)一：切新鮮的小鼠肺

實(shí)驗(yàn)樣品：小鼠肺（無病變）
所用設(shè)備：DTK-1000N振動(dòng)切片機(jī)
實(shí)驗(yàn)步驟
1、活殺一只老鼠，解剖后露出完整肺部；
2、從支氣管處注入2%的生理鹽水沖洗肺部，直到整個(gè)肺呈現(xiàn)出白色狀態(tài)；
3、從支氣管處開始，取下整個(gè)肺，在支氣管口處注入低溫瓊脂，直至充滿全肺，再用生物線扎緊支氣管，防止瓊脂漏出（如圖1）；

*圖1???充滿瓊脂的活體老鼠肺

4、將肺放在4度冰箱里保存12小時(shí)；
5、從冰箱取出肺，進(jìn)行修塊處理，修塊的大小根據(jù)實(shí)驗(yàn)要求而定，一般為1 x 1cm左右；
6、將修好的肺組織粘在切片機(jī)的樣品盤中，設(shè)置切片機(jī)振動(dòng)頻率為55Hz，進(jìn)刀速度為20 mm/min，依次切出200μm和300μm的切片（如圖2和圖3）

*圖2???200μm老鼠肺切片

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*圖3???300μm老鼠肺切片

實(shí)驗(yàn)結(jié)果：切片非常完整，肺泡、纖維等組織完整呈現(xiàn)出來，沒有裂紋，活性保存很好。
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實(shí)驗(yàn)二：切纖維化的人肺

1、實(shí)驗(yàn)樣品：纖維化的人肺（換肺病人的局部組織）
2、所用設(shè)備：DTK-1000N振動(dòng)切片機(jī)
實(shí)驗(yàn)步驟
1、取樣，取樣時(shí)需要避開嚴(yán)重纖維化的肺組織；
2、樣品取出后浸泡在培養(yǎng)液（主要成分為氨基酸）中；
3、取出樣品置于包埋管中，在包埋管里注入低溫瓊脂，然后將包埋管放在冰浴中，使瓊脂快速凝固（如圖4）；
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*圖4???充滿瓊脂的活體肺

4、修塊，去掉多余的瓊脂；
5、將修好的肺組織粘在切片機(jī)的樣品盤中，設(shè)置切片機(jī)振動(dòng)頻率為50，進(jìn)刀速度為20mm/min，依次切出200μm和300μm的切片（如圖5和圖6）

*圖5???200μm肺切片

*圖6???300μm肺切片

實(shí)驗(yàn)結(jié)果：切片非常完整，肺泡、纖維等組織完整呈現(xiàn)出來，沒有裂紋，活性保存很好。
總結(jié)：
老鼠肺可以被完整取下，所以可以采用從支氣管處注入瓊脂的方式來固定，這種固定方式的好處是不會(huì)阻斷空氣中的氧氣進(jìn)入肺循環(huán)，從而極大的增加了肺細(xì)胞的活性。而對于人體肺，取樣時(shí)不能取出整個(gè)肺，無法采用往肺內(nèi)灌注瓊脂的固定方式，只能采用包埋管包埋的外部固定。這要求實(shí)驗(yàn)員非?？焖俚耐瓿烧麄€(gè)實(shí)驗(yàn)操作過程，否則，如果讓肺泡和氧氣阻斷時(shí)間久了，肺細(xì)胞將會(huì)失去活性。另外，選擇性能優(yōu)良的振動(dòng)切片機(jī)，切片時(shí)設(shè)置合適的振動(dòng)頻率和進(jìn)刀速度，也是確保高活性切片的極為重要的因素。
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DTK-1000N振動(dòng)切片機(jī)
主要用于切割沒有冰凍的新鮮或固定好的動(dòng)植物組織，尤其適合腦組織的切片。
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